Sigma：DNase I，DN25-10MG

屬性：

形式：lyophilized powder

質(zhì)量水平：300

specific activity：≥400 Kunitz units/mg protein

分子量：~31 kDa

組成：Protein, ≥85%

溶解性：0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy

application(s)：diagnostic assay manufacturing

diagnostic assay manufacturing

異質(zhì)活性：RNase ≤0.02%

運輸：wet ice

儲存溫度：?20°C

一般描述：

DNase I（脫氧核糖核酸酶I）是一種從牛胰腺分離的核酸內切酶。

我們的DNase I可將雙鏈和單鏈DNA酶解成寡核苷酸和單核苷酸。

牛胰腺DNase存在四種異構酶A, B, C和D，均具有不同的等電點(diǎn)：5.22, 4.96, 5.06及4.78.3。主要形式為A，其次為B和C，D所占的比例最小。

DNase I結構類(lèi)似于核酸外切酶III。其中包括兩個(gè)中央β折疊。每個(gè)β折疊由六個(gè)β-鏈組成。這種復雜的β折疊被大量環(huán)形和螺旋形區域包圍。該酶結構類(lèi)似于核酸外切酶III。[1]

應用：

從原代細胞分離液中去除DNA，在降低粘度的同時(shí)提高產(chǎn)量：

將標記堿基摻入DNA：DNA缺口

放射性標記

生物工藝應用：DNA去除

在RT-PCR前從RNA制劑中去除基因組DNA

體外轉錄

缺口平移

DNase足跡

肌動(dòng)蛋白調控胞內肌動(dòng)蛋白聚合和細胞凋亡

蛋白質(zhì)與核酸紫外線(xiàn)交聯(lián)

DNase參與調控胞內肌動(dòng)蛋白聚合，同時(shí)參與細胞凋亡過(guò)程 [1]

用于從蛋白質(zhì)樣品中除去 DNA。

生化/生理作用：

DNase I是一種內切核酸酶，可作用于與嘧啶相鄰的磷酸二酯鍵以產(chǎn)生具有末端5′-磷酸的聚核苷酸。當Mg2+存在時(shí)，DNAse I可獨立切割DNA的每條鏈且切割位點(diǎn)是隨機的。當Mn2+存在時(shí)，兩條DNA鏈都幾乎是在同樣的位置被切割。[1]二價(jià)陽(yáng)離子如Mn2+, Ca2+, Co2+以及Zn2+都是酶的激活劑。5 mM濃度的Ca2+可穩定酶免收蛋白水解酶的消化。最適pH在7-8之間。[2]來(lái)自牛胰腺的DNAse I由四種色譜可區分的組分A，B，C和D組成，它們的摩爾比分別為4:1:1。僅發(fā)現少量D。[3]2-巰基yi醇、螯合劑、十二烷基硫酸鈉（SDS）[4]和肌動(dòng)蛋白[5]都已知可抑制酶的活性。

特點(diǎn)和優(yōu)勢：

我們的脫氧核糖核酸酶DNAse I基本屬于不含RNAse產(chǎn)品，支持該產(chǎn)品應用。

單位定義：

一Kunitz單位的酶在以I型或III型DNA作為底物時(shí)，在 pH 5.0，37°C的條件下在每mL中每分鐘可引起0.001的A260改變。

外形：

粗制品，含有氯化鈣

制備說(shuō)明：

溶液0.15 M NaCl的10 mg/mL DNAse I溶液分裝保存在?20 °C一周后可能會(huì )丟失<10%的活性。同樣的溶液保存在2-8 °C則可能丟失約20%的活性。當在pH 5和7之間時(shí)，它可在60 °C維持活性最長(cháng)達五小時(shí)，并在68 °C <10分鐘內丟失活性。它在乙酸緩沖液（pH 5.0）和tris緩沖液((pH 7.2)，1 mg/mL濃度)中以6%/小時(shí)的速率丟失活性。

分析說(shuō)明：

通過(guò)縮二脲法測定的蛋白質(zhì)。

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