Biosharp：CCK-8試劑盒，BS350B

細胞增殖-毒性檢測試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)    

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類(lèi)似于MTT的化合物，在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下，可以被還原生成橙黃色水溶性的甲臜（Formazan）。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線(xiàn)性關(guān)系。

使用方法：

1、在96孔板中接種細胞懸液(100 ul /孔)，通常細胞增殖實(shí)驗每孔約2000個(gè)細胞，細胞毒性實(shí)驗每孔約5000個(gè)細胞，具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定)。

2、按照實(shí)驗需要，進(jìn)行培養并給予0-10ul特定的藥物刺激，處理一段適當的時(shí)間(例如: 6,12, 24或48小時(shí))。

3、每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培養體積為200ul，則需加入20ul CCK-8溶液，以此類(lèi)推?？梢杂眉酉鄳考毎囵B基和CCK-8但不加細胞的孔作為空白對照，若擔心所使用的藥物會(huì )干擾檢測，需設置加相應量細胞培養液、藥物和CCK-8溶液但不加細胞的孔作為空白對照。

4、在細胞培養箱內繼續孵育1-4小時(shí)，具體時(shí)間可以通過(guò)預實(shí)驗確定。預實(shí)驗時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續實(shí)驗。

5、用酶標儀測定在450 nm處的吸光值，若無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，可以使用大于600nm的波長(cháng)，例如650nm，作為參考波長(cháng)進(jìn)行雙波長(cháng)測定。

6、如果需要暫時(shí)不測定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室溫，24小時(shí)內吸光度不會(huì )發(fā)生變化。

注意事項：

1、使用96 孔板進(jìn)行檢測時(shí)，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，請注意蒸發(fā)問(wèn)題?？蓪?6 孔板外圍一圈加培養基、水或PBS 保濕。同時(shí)，可以把96 孔板置于培養箱內靠近水盤(pán)的位置以緩解蒸發(fā)。

2、培養時(shí)間根據細胞種類(lèi)的不同和每孔內細胞數量的多少而不同。在正式實(shí)驗前，建議先做預實(shí)驗摸索鋪板的細胞數量以及加入CCK-8 試劑后的培養時(shí)間。

3、鋪板時(shí)請注意保證每個(gè)孔細胞數量均勻，建議鋪板過(guò)程中注意時(shí)?；靹?，防止因細胞沉淀造成不均勻。加入CCK-8 后請前后左右輕輕晃動(dòng)培養板數次，使培養基和CCK-8 溶液充分混勻。

4、本試劑盒的檢測依賴(lài)于脫氫酶催化的反應，如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養基，去掉藥物的影響。若藥物影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

5、加入CCK-8 時(shí)，如果細胞培養時(shí)間較長(cháng)，培養基顏色或pH 值已變化，建議換用新鮮的培養基。

6、用酶標儀檢測前需確保每個(gè)孔內沒(méi)有氣泡，否則會(huì )干擾測定。

7、本試劑盒系無(wú)菌灌裝生產(chǎn)。在使用過(guò)程中，請在生物安全柜內無(wú)菌操作，避免污染。

8、為了您的健康和安全，請穿著(zhù)實(shí)驗服并戴一次性手套或乳膠手套操作。

保存方法：

  長(cháng)期保存建議-20℃保存，可保存2年，但不能反復凍融。

  4℃條件下可保存一年。

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